化學(xué)發(fā)光試劑吖啶酯有很多類型，一般統(tǒng)稱吖啶酯類，還包括吖啶鹽、吖啶磺酰胺、吖啶羧酸等，那么它們之間有什么區(qū)別呢？

目前德晟研發(fā)的吖啶酯類化學(xué)發(fā)光試劑共有六種，分別在傳統(tǒng)吖啶酯的基礎(chǔ)上進(jìn)行了官能團(tuán)的取代，在發(fā)光性能、穩(wěn)定性和便于標(biāo)記蛋白、抗體方面做了優(yōu)化改性。傳統(tǒng)吖啶酯及六種新型吖啶酯如下：

0# AE-NHS

1# DMAE-NHS

2# Me-DMAE-NHS

3# NSP-DMAE-NHS

4# NSP-SA-NHS

5# NSP-SA

6# NSP-SA-ADH

抗水解性不同：

傳統(tǒng)吖啶酯0#（AE-NHS），1～3#在其結(jié)構(gòu)上進(jìn)行了修飾，增大了位阻，增強(qiáng)了抗水解性。0#只在酸性溶液中穩(wěn)定，當(dāng)pH值大于6.3后易水解，而1～3#則不然，如在室溫下，在pH為7.0的PB緩沖液中很穩(wěn)定，16天后，發(fā)光活性只降低3.6％。

穩(wěn)定性不同：

4#、5#、6#吖啶酯則是引入了磺酰胺基團(tuán)，其穩(wěn)定性較吖啶酯類（0#、1#、2#、3#）高，其原因是由于C-N鍵與C-O鍵的鍵級(jí)不同，C-N鍵大于C-O鍵。吖啶酰胺類化合物（4～6#）抵抗水解的能力也強(qiáng)于吖啶酯類（0～3#）化合物。4～6#在酸性溶液中(pH<4.8)都很穩(wěn)定，與蛋白質(zhì)偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低，凍干品在-20℃下，可以保存一年以上。

發(fā)光原理相同，離去基團(tuán)不同：

吖啶酯和吖啶磺酰胺的反應(yīng)機(jī)理是相同的，只是離去基團(tuán)不團(tuán)。在堿性條件下，過(guò)氧化氫與吖啶的9位碳原子發(fā)生加成，加成產(chǎn)物在堿性條件下形成的過(guò)氧負(fù)離子再親核進(jìn)攻羰基碳，離去基團(tuán)離去并進(jìn)一步形成不穩(wěn)定的四元環(huán)中間體1，2-二氧雜環(huán)丁烷酮，開(kāi)環(huán)后形成激發(fā)態(tài)的吖啶酮，其返回到基態(tài)的過(guò)程中釋放出光子，波長(zhǎng)為470nm。吖啶酯和吖啶磺酰胺的離去基團(tuán)分別為-OR和-NR（SO2R），當(dāng)離去基團(tuán)上R3，R4為給電子基團(tuán)時(shí)（如R3，R4 =CH3），能起到增大空間位阻的同時(shí)降低羰基親電性。

吖啶酯發(fā)光原理

除了上述幾點(diǎn)外，不同吖啶酯的親水性也有差異，另外離去基團(tuán)上不同的R基團(tuán)也是的它們的表及方法有差異，需要根據(jù)所標(biāo)記的蛋白、抗體來(lái)作選擇。