作為生物緩沖劑家族中的中流砥柱,是合成Bis-Tris,TES,TAPS中是必不可少的反應物。后面幾種均為生物化學實驗和分子生物學實驗中經常使用的緩沖劑,他們結構中都含有Tris的分子結構。下面我們來列舉tris和以他合成的Bis-Tris這兩種常用化學物質的應用場景,淺析它的優越化學性能。
三羥甲基氨基甲烷(行業常稱作Tris),25°C下其pKa為8.04,緩沖范圍7.0~9.0。其常用實驗如下:
(1)常用于凝膠電泳緩沖液中,例如TAE或TBE;
(2)常用于制備Laemmli緩沖液;
(3)常與甘氨酸和SDS一起制備運行緩沖液和上樣緩沖液;
(4)可以用作陰離子交換層析中的結合緩沖液和洗脫液;
(5)被用作RNA雜交和DNA裂解的緩沖液。
在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,我們在配制過程中要特別注意應用環境的影響因素;Tris的伯胺基在特定條件上與多種分子發生反應,包括RNA抑制劑,常見金屬如Ag+,Co2+和Cu2+等,酶,Tris不適合喹啉甲酸測定。
Bis-Tris,雙(2-羥乙基)氨基(三羥甲基)甲烷,兩性陰陽離子緩沖劑,25°C下pKa為6.46,pH緩沖能力范圍為5.2~7.8。其應用領域如下:
(1)作為各種類型電泳的樣品緩沖液,凝膠緩沖液和儲存保質緩沖液;
(2)作為陰離子交換色譜法中的緩沖液;
(3)被用于鹵代烷烴脫鹵酶結晶過程的X射線晶體學研究;
(4)低導電性和高靈敏度,是核磁共振光譜的有效緩沖液;
(5)與人肝臟型脂肪酸結合蛋白(FAB)相互作用并影響蛋白質動力學。
Bis-Tris與Fe3+和Cr3+形成絡合物,與許多常見金屬形成絡合弱復合物,因此在含有金屬離子的溶液中使用時,應考慮其絡合因子的范圍。此外,在有系統壓力變化的反應釜,可使用Bis-Tris緩沖溶液。Bis-Tris是二甲基胂酸鹽的替用品以避免其高毒性,但同樣不喹啉甲酸測定。
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