魯米諾(luminol),又名發光氨,它常溫下是一種黃色晶體或者米黃色粉末,是一種比較穩定的化學試劑。同時,魯米諾又是一種強酸,對眼睛、皮膚、呼吸道有一定刺激作用。
它是一種最古老的和最常用的試劑,在堿性條件下可被過氧化物氧化,同時發光,魯米諾和過氧化物之間的氧化還原反應需要催化劑,這種催化劑一般為多價金屬離子、過氧化物酶如鐵、辣根過氧化物酶等,此種方法常用于檢測過氧化物、重金屬、過氧化物酶的含量,以及由此衍生的檢測自由基、進行毒物分析和基于過氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。
在通常情況下與過氧化氫在某些催化劑存在時化學發光反應非常迅速。最常用催化劑是金屬離子,在很大濃度范圍內,金屬離子濃度與發光強度成正比,從而可進行某些金屬離子的化學發光分析,利用這一反應可以分析那些含有金屬離子的有機化合物,達到很高的靈敏度。其次是利用有機化合物對魯米諾化學發光反應的抑制作用,測定對化學發光反應具有猝滅作用的有機化合物。其三是通過偶合反應間接測定無機或有機化合物。
魯米諾發光原理
一是次氯酸鈉氧化魯米諾使其發光;
二是過氧化氫與次氯酸鈉反應生成氧氣氧化魯米諾使其發光:
首先是次氯酸鈉和過氧化氫反應的方程式:NaClO+ H2O2 == NaCl + O2 + H2O
其次,魯米諾與氫氧化物反應時生成了一個雙負離子(Dianion),它可被過氧化氫分解出的氧氣氧化,產物為一個有機過氧化物。該過氧化物很不穩定,立即分解出氮氣(魯米諾被有機氧化劑如二甲基亞砜氧化后不是生成氮氣,而是生成含氮有機物),生成激發態的3-氨基鄰苯二甲酸。激發態至基態轉化中,釋放的能量以光子的形式存在,波長位于可見光的藍光部分。
魯米諾(發光氨)作為化學發光試劑常用于檢測之中,不過,有些人會問,魯米諾在應用的時候一般會選擇哪些發光檢測的方法呢?德晟告訴你的3種方法,分別為催化劑加快發光,抑制劑間接測定,通過偶合間接測定。
催化劑加快發光方法估計都明白,魯米諾發光檢測發光速度太慢,所以在檢測中常要加入一些催化劑來加速。在化學發光免疫分析中我們會經常用到的催化劑是過氧化物,特別是辣根過氧化物酶,而除了辣根酶,催化劑還包括一些金屬配合物、過渡金屬離子,比如血紅蛋白、鐵離子、錳離子等。
有加速就有抑制,有些有機物會抑制劑來抑制魯米諾的發光,如含有酚羥基團的還原性化合物,那就可以利用這點對此類有機物進行間接測定,這便是第二種測定方法。
通過偶合間接測定的方法是指將能夠產生或者消耗化學發光反應物的一個反應與另一個化學發光反應結合起來,從而可以實現某些物質的間接化學發光測定。在測定某些底物酶的純度的時候會用到此方法。