在免疫測定領域,夾心法作為一種經(jīng)典且高效的檢測方法,憑借其獨特的原理和顯著的優(yōu)勢,在生物樣本分析中發(fā)揮著重要作用。根據(jù)檢測物質(zhì)的不同,夾心法可分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法,這兩種方法在臨床診斷、科研檢測等多個場景中廣泛應用。了解它們的原理、優(yōu)缺點,有助于我們更好地選擇合適的檢測方法,提升檢測的準確性和可靠性。
一、雙抗體夾心法
1、反應原理
雙抗體夾心法以抗原為檢測目標。在檢測過程中,首先將捕獲抗體固定在固相載體上,當含有待測抗原的樣本加入后,樣本中的待測抗原會與固相載體上的捕獲抗體發(fā)生特異性結(jié)合,形成“固相載體 - 捕獲抗體 - 待測抗原”復合物。隨后,通過清洗步驟去除未結(jié)合的雜質(zhì),再加入標記抗體。標記抗體同樣能夠特異性地識別并結(jié)合待測抗原的另一個抗原表位,從而形成“固相載體 - 捕獲抗體 - 待測抗原 - 標記抗體”雙抗體夾心復合物。最終,通過檢測標記抗體所攜帶的信號,如酶催化底物產(chǎn)生的顯色信號或發(fā)光物質(zhì)發(fā)出的光信號,且該檢測信號與樣本中待測抗原的量成正相關,以此實現(xiàn)對待測抗原的定量分析。
2、應用場景與優(yōu)勢
雙抗體夾心法在傳染病抗原檢測、腫瘤標志物檢測等領域應用廣泛。由于使用了兩種不同的特異性抗體,該方法具有極高的靈敏度,能夠檢測出樣本中微量的抗原。其特異性也非常出色,兩種抗體的雙重識別機制有效降低了非特異性結(jié)合的概率,減少了假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。此外,雙抗體夾心法的信號值和抗原濃度值之間呈現(xiàn)良好的比例關系,使得檢測曲線寬、線性好,便于準確地進行定量分析。
二、雙抗原夾心法
1、反應原理:雙抗原夾心法主要用于檢測樣本中的抗體。其原理是將捕獲抗原固定在固相載體上,當樣本中的待測抗體加入后,待測抗體與固相載體上的捕獲抗原發(fā)生特異性結(jié)合,形成“固相載體 - 捕獲抗原 - 待測抗體”復合物。經(jīng)過清洗去除未結(jié)合的物質(zhì)后,再加入標記抗原。標記抗原同樣能夠特異性地與待測抗體結(jié)合,從而形成“固相載體 - 捕獲抗原 - 待測抗體 - 標記抗原”雙抗原夾心復合物。通過檢測標記抗原所產(chǎn)生的信號強度,即可得知樣本中待測抗體的含量,且檢測信號與樣本中待測抗體的量成正相關。
2、適用范圍與特點:雙抗原夾心法在自身免疫性疾病抗體檢測、傳染病抗體篩查等方面發(fā)揮著重要作用。與雙抗體夾心法類似,它也具有較高的靈敏度和特異性,能夠準確檢測出樣本中的抗體。由于檢測的是總抗體,在某些情況下,這一特點可以快速判斷樣本中是否存在抗體,無需區(qū)分抗體的具體種類。然而,當需要對抗體亞型進行區(qū)分時,這一特點則可能成為限制因素。
三、雙抗體夾心法與雙抗原夾心法的優(yōu)缺點
1、共同優(yōu)點:兩種方法均利用了抗體或抗原的特異性結(jié)合,靈敏度高,能夠檢測到低濃度的目標物;使用兩種不同的抗體或抗原,有效降低了非特異性結(jié)合,特異性好;信號值和濃度值的比例關系良好,檢測曲線寬、線性好,便于定量分析;反應原理簡單,操作相對容易,易于在實驗室中實施。
2、共同缺點:它們都易受類風濕因子(RF)、異嗜性抗體、人抗動物抗體等干擾物質(zhì)的影響。為解決這一問題,通常需要加入阻斷劑或者對原料進行改造,這無疑增加了檢測成本。當使用夾心法檢測抗體時,只能檢測樣本中的總抗體,無法對抗體的種類進行區(qū)分。
在免疫測定夾心法的應用過程中,優(yōu)質(zhì)的原料是確保檢測準確性和可靠性的關鍵。湖北新德晟材料科技有限公司專注于體外診斷試劑原料的研發(fā)與生產(chǎn),為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法提供了高品質(zhì)的原料支持。憑借卓越的產(chǎn)品質(zhì)量和專業(yè)的技術服務,湖北新德晟成為眾多實驗室和企業(yè)在免疫測定領域值得信賴的合作伙伴。如果您有采購需要,歡迎隨時聯(lián)系!
