在細胞培養過程中，維持穩定的 pH 環境很重要。HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）緩沖液因其良好的緩沖性能和生物相容性，被廣泛應用于細胞培養體系中。由于細胞的生長和代謝對 pH 非常敏感，微小的 pH 變化可能會影響細胞的生理功能、酶活性以及蛋白質的合成和折疊。HEPES 緩沖液能夠在一定范圍內抵抗外界酸堿的影響，保持細胞培養環境的 pH 相對穩定。那HEPES緩沖溶液該如何制備呢？下面一起來看看。

一、不同類型 HEPES 緩沖液的配制方法
1、單純的 HEPES + NaOH 緩沖液 
（1）材料準備： HEPES：119.15g、蒸餾水400ml、 0.5 - 1M 的 NaOH 水溶液。 
（2）配制步驟：將 119.15g HEPES 溶解在 400ml 蒸餾水中。用 0.5 - 1M 的 NaOH 水溶液緩慢調節溶液的 pH 至 7.0。在調節 pH 的過程中，要逐滴加入 NaOH 溶液，并不斷攪拌和監測 pH 值，避免 pH 過高或過低。 當溶液的 pH 達到 7.0 后，用蒸餾水定容至 500ml，并將配制好的緩沖液于4攝氏度保存。 
2、加少量鹽的 HEPES Buffer 配方 
（1）材料準備：HEPES：6.5g、NaCl：8.0g、Na?HPO?7.0g、 H?O?.198g、0.5M NaOH 水溶液、 蒸餾水。
（2）配制步驟：將 6.5g HEPES、8.0g NaCl、7.0g Na?HPO?和 0.198g H?O 溶解在適量的蒸餾水中。用 0.5M NaOH 水溶液調節溶液的 pH 值。同樣，在調節 pH 時要小心操作，逐滴加入 NaOH 溶液并監測 pH 值。調節好 pH 值后，用蒸餾水定容至 500ml。 
3、2×HEPES 緩沖鹽溶液的配制 
（1）材料準備：NaCl1.6g、KCl0.074g、Na?HPO?·2H?O 0.027g、葡聚糖或右旋糖酐0.2g、HEPES 1g、0.5M NaOH 水溶液、蒸餾水。 

（2）配制步驟：將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na?HPO?·2H?O、0.2g 葡聚糖或右旋糖酐和 1g HEPES 溶解在 90ml 的蒸餾水中。用 0.5M NaOH 水溶液調節溶液的 pH 值至所需范圍，然后定容至 100ml。

 

二、HEPES 緩沖液在細胞培養液中的使用方法
1、直接加入培養液中：每 1000ml 培養液中加入 2.38 克 HEPES。待 HEPES 溶解后，用 1N NaOH 調 pH 至 7.2。 對培養液進行過濾除菌后即可使用，此時 HEPES 的使用濃度為 10mmol/L。 
2、配制成貯存液使用：
（1）配制 100x 貯存液（1mol/L）：取 23.8g HEPES 溶于 90ml 雙蒸水中，用 1N NaOH 調 pH 至 7.5 - 8.0，然后用水定容至 100ml。
（2）對貯存液進行過濾除菌，分裝小瓶（2ml/瓶），可在 4℃或 -20℃保存。 

（3）使用時，取 99ml 培養液加入 1ml 貯存液，最終應用濃度仍為 10mmol/L。 

三、配制 HEPES 緩沖液的注意事項 
1、材料純度：為了確保緩沖液的質量和穩定性，應使用高純度的 HEPES 和其他化學試劑，雜質會影響緩沖液的性能和對細胞的影響。
2、pH 調節：在調節 pH 值時，要小心操作，逐滴加入 NaOH 溶液，并不斷監測 pH 值。避免 pH 過高或過低，以免對細胞產生不良影響。 3、溶解充分：在溶解 HEPES 和其他化學試劑時，要確保充分攪拌，使其完全溶解。未溶解的顆粒可能會影響緩沖液的性能和細胞培養的結果。 
4、滅菌處理：無論是直接加入培養液中還是使用貯存液，都需要對緩沖液進行過濾除菌處理，確保細胞培養環境的無菌。 
5、儲存條件：配制好的 HEPES 緩沖液應儲存在適當的溫度下，如冷藏，建議是既配既用，保持其穩定性和有效性，避免長時間暴露在高溫或光照下。 

HEPES 緩沖液在細胞培養中起著重要的作用，能夠維持穩定的 pH 環境，為細胞提供適宜的生長條件。通過不同的配制方法，可以得到適合不同需求的 HEPES 緩沖液。在配制過程中，要注意材料的純度、pH 調節、溶解充分、滅菌處理和儲存條件等因素，才能充分確保緩沖液的質量和細胞培養的成功。

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