為實驗選擇合適的生物緩沖液可能很棘手。這個過程就像玩“猜猜誰”。像游戲一樣,您從非常廣泛的緩沖劑列表開始,然后慢慢地提出問題和研究答案以縮小選擇范圍。到目前為止,您已經了解了很多關于的知識,并且正在尋找更多有關此小游戲的指南。在本文中,將會介紹在選擇生物緩沖劑時您應考慮的事項。
步驟1:確定實驗的pH
在許多實驗中,您需要更改條件以使蛋白質在溶液中保持滿意狀態。舉例來說,假設您在pH 7.4的條件下進行了模擬生物條件的實驗,但是您的蛋白質在此pH值下不穩定,因此您需要優化這種情況。要記住的一件事,目標pH值通常離蛋白質等電點(pI)大約一個pH單位(有時稍遠)。pI是給定的分子或蛋白質不帶凈電荷的pH值。當蛋白質達到其pI時,它的溶解度就不會那么高。
步驟2:提出正確的問題
就像游戲一樣,您必須提出正確的問題,以確保獲得正確的緩沖。在這里還是要重點介紹一些重要的問題:
1.溶液中是否存在可能與緩沖液絡合的金屬?
2.您的目標蛋白是一種酶嗎?它屬于哪一類?
3.配體結合,蛋白質穩定性或電泳的離子強度要求是什么?
4.現有哪些文獻告訴我建議的緩沖劑與所用系統的相互作用?
所有這些問題,將進一步幫助您找到最適合實驗的緩沖劑。
步驟3:考慮下游實驗
研究人員經常遇到的一個絆腳石是,發現選擇的緩沖劑不適用于下游應用。例如,已知Tris會對布拉德福德分析產生負面影響。其他生物緩沖液會對質譜產生負面影響。或許您可能已經縮小了緩沖區的范圍,只是發現它在將來可能無法很好地工作。這就像“猜猜誰”的噩夢般的版本。在這種情況下,您必須進行一些研究以找到合適的替代方法。但是,既然您已經縮小了所需的特征,那么進行這項研究就會容易一些。
步驟4:尋找合適的緩沖劑
太好了,現在您確切知道要使用什么緩沖劑了,到了采購環節,對于大多數研究人員而言,底價和純度基本上是在購買緩沖液的重要標準。當然,您可以去找比較有名的企業,咨詢這個企業在業內的口碑。在這里推薦一家企業,不僅提供出色的緩沖劑產品(TRIS、HEPES、BICINE、CAPS等熱門產品)。而且還提供了出色的內容和服務支持,可幫助您進行實驗,重要的是,價格相對其他廠家更具競爭力。